波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞說明書

Rosetta(DE3) Competent Cell

Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞

目錄號：YJ0811

保存條件：-80℃保存。

組分說明

               Cat. No.                              YJ0811A

               Size                                   10×100 μl

               Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

               Control DNA pUC19，0.1 ng/μl              10 μl

產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品是采用進口Rosetta菌株，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的

6種稀有密碼子（ AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）對應(yīng)的tRNA，提高外源

基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平。使用  pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可

達10 7

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

    注意事項

    1．感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細胞應(yīng)在  -80℃下保存，不可多次凍融和放

       置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。

       以下實驗以50 μl感受態(tài)細胞為例。

    2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量

       的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

    4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

    5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，

       倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

       2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

       3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。