波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書

MaxiGel Extraction Kit

貨號：  YJ0518

保   存：  室溫

組分說明

Cat.No.

YJ0518

50

KitSize

BufferPG

100ml

15ml

10ml

10ml

50

BufferPS

BufferPW（concentrate）

BufferEB

SpinColumnDL 

CollectionTube（2ml）

50

產品簡介

     本試劑盒采用新型硅基質膜技術，通過快速，簡單的結合-洗滌-洗脫步驟可從大量普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純

化 50bp-50kb 的 DNA 片段，溶膠速度快，每個吸附柱zui高可吸附 30 μg 的 DNA，純化過程中有效去除引物、核苷酸、

酶、礦物油、瓊脂糖等雜質，獲得高純度，完整性好的 DNA 片段，回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用

于測序、連接和轉化、酶切、標記、體外轉錄等分子生物學實驗。

注意事項

1..*次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

2.使用前請檢查BufferPG是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。

3.電泳時使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

4.切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。

5.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關。

6.所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心。

自備：無水乙醇，離心管

操作步驟

1. 將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入干凈的離心管（自備）中，稱取重量。 

注意：若膠塊的體積過大，可將膠塊切成碎塊。

2. 向膠塊中加入3倍體積Buffer PG；當瓊脂糖凝膠濃度>2%時，建議使用6倍體積BufferPG（如凝膠重為100mg，其體積可視為100μl，依此類推）。

3. 50℃孵育10分鐘，其間不斷溫和地上下顛倒離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續放置幾分鐘，直至膠塊*溶解。

注意：1）在膠充分溶解后檢測pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0）將pH值調到5-7。

      2）膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在較高溫度時結合 DNA 的能力較弱。

4.（可選步驟）當回收片段<500bp或>4kb時，應加入1倍膠體積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠為100mg，則加入100μl異丙醇）。

注意：當回收片段為500bp-4kb時，加入異丙醇不會影響回收率。

5.柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200  μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6.將步驟3或者步驟4所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl 可分批加入。

7.（可選步驟）向吸附柱中加入500μlBufferPG，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：如果后續實驗用于直接測序、體外轉錄或顯微注射，推薦用此步驟以除去所有凝膠。8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

9. 注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入BufferPW靜置2-5分鐘再離心。12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以*晾干。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

10.  將吸附柱放到一個新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5），室溫放置2分鐘。12,000rpm離心2分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。注意：1） 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。

2） 為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重復步驟10。

3） 洗脫體積不應小于50μl，體積過少會影響回收效率。

4） 如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。

5）回收大于10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。