波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒說明書微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃避光保存；

試劑二：粉劑 ×1 支，4℃避光保存；臨用前使用20ml試劑一充分溶解，配好的試劑4℃避光可保存一周。

試劑三：液體 110μL×1 支，4℃保存；臨用前將試劑三用蒸餾水稀釋10 倍，用多少配多少。試劑四：液體 2.5mL×1 瓶，-20℃保存。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾

水

產(chǎn)品說明：

SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可與 WST-8 反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液黃色越深，說明SOD 活性愈低，反之活性越高。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

(1)細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液（生理鹽水或者PBS），超聲波破碎（功率 20%或 200w，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清， 置冰上待測(cè)。

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（生理鹽水或者PBS）進(jìn)行冰浴勻漿； 8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

(2)血清(漿)樣品：直接檢測(cè)二、測(cè)定操作表：

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm，蒸餾水調(diào)零。

2.測(cè)定前將試劑一、二和四 37℃水浴 5min 以上。

3.樣本測(cè)定（按順序加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置 30min 后，450nm 處測(cè)定各管吸光值 A。

注意事項(xiàng)：

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做三管，求平均值。

3、SOD 為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是：

（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；

（2）沒有按順序加試劑；

（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間可以延長(zhǎng)到 40min）。

（4）對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

（5）可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般，將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

SOD 活性計(jì)算：

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率＝(A 對(duì)照管－A 測(cè)定管) ÷A 對(duì)照管× 100%

盡量使樣本的抑制百分率在 10-90%范圍內(nèi)。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 10%或大于90%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用提取液適當(dāng)稀釋；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣本。

2、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD

酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)。

3、SOD 酶活性計(jì)算：

血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1 －抑制百分率)×V 反總]÷V 樣

=20×抑制百分率÷(1 －抑制百分率) 組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞SOD 活力計(jì)算：

按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1 －抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr )

=20×抑制百分率÷(1 －抑制百分率)÷Cpr

需要另外測(cè)定，建議使用上海研謹(jǐn)生物科技有限公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。按樣本鮮重計(jì)算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1 －抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總)

=20×抑制百分率÷(1 －抑制百分率)÷W c.按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1 －抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)

=0.04×抑制百分率÷(1 －抑制百分率)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；

V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；

V 樣總： 加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL ；

W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：