波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

大鼠神經(jīng)絲蛋白（NF）免疫組化試劑盒

該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性神經(jīng)絲蛋白（NF）抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的神經(jīng)絲蛋白（NF）一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。

試劑盒所含試劑：

試劑A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（選用）

試劑B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL

試劑C （原裝/分裝）已稀釋的即用型神經(jīng)絲蛋白（NF）一抗（2.5ml）

試劑D （原裝/分裝）生物素化羊抗兔IgG 1支

（濃度1.5 mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液20ml

試劑E HRP-SA復(fù)合物1支（濃度1 μM，稀釋比1:50~1:200）100 μL

試劑F DAB顯色液 5ml

用戶自備試劑：

1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）

三羥基氨基甲完烷1.21g

氯化鈉7.6g

加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，最后定容至1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）

2．抗原修復(fù)液（依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）

10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液

檸檬酸0.38g

檸檬酸三鈉2.45g

加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，最后定容至1000mL

或：0.5M EDTA修復(fù)液（pH8.0）

EDTA·2H2O 186.1g

檸檬酸三鈉2.45g

加蒸餾水700mL，用10mM NaOH調(diào)pH值至8.0，最后定容至1000Ml

3. 緩沖甘油封固劑10 mL

4. Tween 20 5 mL

石蠟包埋組織切片免疫染色

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）：

石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度

1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；

2.脫蠟： 切片放入盛有二甲本苯的容器中脫蠟3次（即二甲本苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；

3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O洗2×2min；

4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見(jiàn)附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5步封閉。

5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜；

7.洗滌： TBS-T洗滌（3×5 min）；

8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30 min；

10.洗滌： TBS-T洗滌（3×5 min）；

11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），37℃濕盒中孵育30 min；

13.洗滌： TBS-T洗滌（3×5 min），TBS洗滌（2×5 min）；

14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；

15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；

17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。

注意事項(xiàng)：

1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來(lái)水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。

2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。

3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。

4. 封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會(huì)影響結(jié)果觀察。

5. 如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。

附1：

抗原修復(fù)方法

常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01M pH6.0）、EDTA抗原修復(fù)液（pH8.0或9.0）等等。

一、酶消化修復(fù)法

切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。

二、微波抗原修復(fù)法

微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或高檔繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來(lái)水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時(shí)間存在差異，須自行調(diào)整。

三、直接高壓抗原修復(fù)法

取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計(jì)時(shí)1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。

四、隔水式高壓抗原修復(fù)法

不銹鋼高壓鍋中加自來(lái)水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計(jì)時(shí)4~8 min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：