波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

植物RNA提取試劑盒（DNase I）說明書

RNApure Plant Kit（DNase I）

植物RNA提取試劑盒（DNase I）說明書

Cat. No.   K0559

保存：DNase I、10×Reaction Buffer：-20  ℃

其它組分：室  溫

組分說明

                                              Cat No.               K0559

                                              Kit Size                 50

                                              DNase I                1000 U

                                        10×Reaction Buffer           1000  μl

                                             Buffer RL               35 ml

                                            Buffer RLC               35 ml

                                            Buffer RW1               40 ml

                                    Buffer RW2（concentrate）          11 ml

                                        RNase-Free Water             10 ml

                                      Shredder Spin Column             50

                                         Spin Columns RM               50

                                    Collection Tube（1.5 ml）            50

                                     Collection Tube（2 ml）            100

產品簡介

    本試劑盒用于從各種植物中提取純化高品質總 RNA，也適用于真菌菌絲RNA的提取。*的 Shredder 分離柱，用于勻質化和過濾高粘度的植物或真菌裂解物，同時采用硅基質膜吸附 RNA 進行純化，使多聚糖等各種污染物通過洗滌被有效去除，經洗脫的RNA可直接用于各種下游實驗。由本試劑盒提取RNA分子量大于200堿基，純度高，幾乎無DNA殘留。

如果是對微量 DNA 非常敏感的 RNA 實驗，殘留的 DNA 可利用無 RNase 的 DNase 在柱上進行消化去除。提取的 RNA可用于 Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR 和體外翻譯等實驗。

注意事項

1.  預防RNase污染，應注意以下幾方面：

    1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

    2）玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。

    3）配制溶液應使用無RNase的水。

    4）操作人員戴一次性*罩和手套，實驗過程中要勤換手套。

2.  提取的樣品避免反復凍融，否則影響 RNA 提取的量和質量。

3.  Buffer RL 在使用前請加入β-巰基乙醇，1 ml Buffer RL 加 10 μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的 Buffer RL 室溫可保存 1 個月。Buffer RLC 使用時不需加β-巰基乙醇。

4.  第-次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在 Buffer RW2 中加入無水乙醇。

5.  Buffer RL 和 Buffer RLC 如果產生沉淀，請加熱使其溶解后室溫放置。

6.  所有離心步驟均在室溫下進行，且所有操作步驟動作要迅速。

自備試劑：β-巰基乙醇、無水乙醇（新開封或提取RNA）  

操作步驟

 1.   50-100 mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末，加入600 μl Buffer RL（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇）或Buffer RLC。渦旋振蕩使其充分裂解。

 注意：1）Buffer RL主要成分為異硫氰酸胍，適用于大多數植物組織的裂解。但有些植物組織（如玉米的胚乳），由于次級代謝產物較特殊，異硫氰酸胍使樣品產生沉淀，導致RNA提取效果不佳，此時可加入Buffer RLC替代Buffer RL。

 2）56℃孵育1-3分鐘有助于組織的裂解，但是淀粉含量高的植物不要進行高溫孵育。

 2.   將步驟1所得全部液體轉移至已裝入RNase-Free 2 ml收集管（RNase-Free 2 ml Collection Tube）的Shredder Spin Column中，12,000 rpm（~13,400×g）離心2分鐘，將收集管中的上清液轉移到一個新的離心管（自備）中。

注意：1）在吸取液體時可以將槍頭剪掉，便于取樣。

2）Shredder Spin Column可以除去大部分的碎片，但仍會有小部分流出，離心后會在收集管內形成沉淀，在進行下一步時注意避免吸到沉淀。

 3.   在步驟2所得干凈的裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇，迅速混勻。

注意：加入乙醇后可能會產生沉淀，但不影響后續試驗。

 4.   將上步得到的溶液轉移到吸附柱（Spin Columns RM）中（吸附柱已裝入收集管中）,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請分兩次轉入; 10,000 rpm（~8,000 x g）離心15秒，棄掉廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

 5.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1，10,000 rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

 6.   配制DNase I  混合液：取52 μl RNase-Free Water，向其中加入8  μl 10×Reaction Buffer 和20  μl DNase I（1U/μl），混勻，  配制成終體積為80 μl的反應液。

 7.   向吸附柱中直接加入80 µl DNase I  混合液，20-30℃孵育15分鐘。

 8.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1, 10,000 rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

 9.   向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2（使用前檢查是否加入無水乙醇）, 10,000 rpm離心15秒,棄廢液。

 10. 重復步驟9。

 11. 將吸附柱放回收集管中，12,000 rpm離心1分鐘，將吸附柱置于室溫數分鐘，以*晾干。

     注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。

 12. 將吸附柱裝入新的RNase-Free 1.5 ml  收集管中，向吸附膜的中間加入30-50 μl RNase-Free Water，室溫放置1分鐘，10,000 rpm離心1分鐘，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。

 注意：1）  RNase-Free Water 體積不應小于 30 μl，體積過小影響回收率。

2）  如果要提高RNA的產量，可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復步驟12。

3）  如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復步驟12。

實驗代做服務：