波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書

Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit

目錄號：K0199   

保存：蛋白酶抑制劑混合物：-20℃

   其它組分：2                   - 8  度    

組分說明

Catalog no.               K0199B

Kit Size                   50 次

Nc-試劑   A                   50 ml

Nc-試劑    B                  3 ml

Nc-試劑   C                   25 ml

蛋白酶抑制劑混合物                       750  μl

產品簡介

    Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒能夠簡單、快速的提取來源于哺乳動物細胞及組織的細胞核和細胞漿蛋白，所提取蛋白保持生物學活性。本試劑盒首先通過細胞漿蛋白抽提試劑裂解細胞膜，釋放細胞漿蛋白，然后通過離心得到細胞核沉淀。

后通過細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高，有效避免核/漿蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、報告基因檢測以及酶活力測定等后續操作。

注意事項

1. 如需提取磷酸化蛋白請在抽提試劑中加入磷酸酶抑制劑。

2. 所有樣品操作請置于冰上進行。

3. 可根據具體實驗情況調整試劑用量，保證各試劑使用比例為                               Nc-試劑   A：Nc-試劑     B：Nc-試劑     C=100：5.5：50。

4. 可以采用更高的速度來離心。

5. 戴手套操作。                                                                                                                                                                

操作步驟        

l    細胞中胞漿、胞核蛋白的提取

 1.  收集細胞，計數。

 2.  請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷，按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物（例如990μ抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物），使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意：在進行蛋白抽提前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3.  1×107細胞中加入1 ml Nc-試劑A（使用前加入蛋白酶抑制劑混合物），                   渦旋5秒以充分混勻，冰上孵育20分鐘。

    注意：各種細胞的特性不同，需要根據不同細胞的特性調整Nc-試劑A的用量，如果蛋白濃度小，按比例減少Nc-試劑A及后續Nc-試劑B、Nc-試劑C的用量。

 4.  加入55    μl Nc-試劑    B，渦旋5秒以充分混勻，冰上孵育1分鐘。

 5.  4℃  12,000 rpm（13,400×g）離心15分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至另一離心管中，-20℃保存待測（此提取液為胞漿蛋白）。

 6.  向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C（使用前加入蛋白酶抑制劑混合物），                      渦旋5秒以充分混勻，重懸沉淀，冰上孵育40分鐘，每隔10分鐘渦旋混勻一次，每次約15-30秒。

 7.  4℃  12,000 rpm離心15分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至另一離心管中，-20℃保存待測（此提取液為胞核蛋白）。 組織中胞漿、胞核蛋白的提取

 1. 取材，保存組織。

 2. 請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷，按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物（例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物），使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意：在進行蛋白抽提前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3. 稱組織重量，每100 mg組織中加入1 ml Nc-試劑A（使用前加入蛋白酶抑制劑混合物），用勻漿器在冰上充分勻漿，

    放置在冰上孵育20分鐘。

    注意：各種組織的特性不同，需要根據不同組織調整Nc-試劑A的用量，如果蛋白濃度小，按比例減少Nc-試劑A及后續Nc-試劑B、Nc-試劑C

的用量。

 4. 加入55μl Nc-試劑B，渦旋5秒以充分混勻，放置在冰上孵育                        1分鐘。

 5.  4℃12,000 rpm（13,400×g）離心15分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至另一離心管中，-20℃保存待測（此提取液為胞漿蛋白）。

 6. 向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C（使用前加入蛋白酶抑制劑混合物），                      渦旋5秒以充分混勻，重懸沉淀，冰上孵育40分鐘，每隔10分鐘渦旋混勻一次，每次約15-30秒。

 7.  4℃12,000 rpm離心15分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至另一離心管中，-20℃保存待測（此提取液為胞核蛋白）。

實驗代做服務：