波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

產品簡介：

神經HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書

 上個世紀 70 年代，Kristensopn 和 Olsson 報道了HRP可神經末梢攝取，經軸漿逆行運輸至神經元胞體，經組織化學方法可顯示出神經元的輪廓，從而開發出 HRP  追蹤神經元示蹤技術，即為 HRP 法。3,3',5,5'-四甲基聯*苯*胺(TMB)是非常優越的酶免試驗顯色劑，能溶解于多種有機溶劑和雙蒸水中，為穩定的無色溶液，不適量過氧*化脲或雙氧*水不緩沖液混   勻后，不過氧化物酶作用產生清晰的藍色產物，極易觀察，在辣根過氧化物酶的催化下 , TMB 會產生藍色沉淀，該沉淀不溶于水和乙醇，顯色后呈藍色，可在顯微鏡下觀察。

神經 HRP 示蹤顯色液(TMB 法)是動物經麻醉、注入HRP后，游離或絡合型的 HRP 不氧化劑反應生成絡合物，該絡合物氧化供氫的 TMB 顯色劑，呈藍色，在顯微鏡下清晰可見，該檢測法較 DAB  法靈敏。該顯色液僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

(一)、準備工作

1、動物麻醉：多用(3.5%)戊巴比托妥鈉作為麻醉劑，大鼠的麻醉劑量為 0.25-0.35ml/100g。

2、導入HRP：有壓力注射法、電泳法以及周圍神經系統的注射涂抹等法。

3、確定動物存活期。

4、動物灌注：麻醉后，經左心室升主動脈插管行心內灌注固定。先用生理鹽水或 PBS 快速灌注。隨后用 4%的多聚*甲醛固定液灌注，先快后慢，時間控制在 30-40min。后用 10% 蔗糖磷酸緩沖液(pH7.4)。

5、取材：取組織置于 20%的蔗糖磷酸鹽緩沖液中，切片厚度 40μm，存于蔗糖磷酸鹽緩沖液備用。

 (二)、顯色反應

1、配制 TMB孵育液：取適量的TMB assay buffer 和TMB顯色液，按 TMB assay buffer： TMB顯色液=39:1 的比例混合，即為 TMB孵育液，即配即用，不宜保存。

2、配制TMB顯色工作液：取適量的TMB孵育液和TMB增強劑，按TMB孵育液：TMB 增強劑=2000～8000：1 的比例混合(具體比例應根據具體時間摸索確定)，即為TMB顯色工作液，即配即用，不宜保存。

3、配制 1×TMB Wash buffer：取適量的TMB Wash buffer(20×)，按TMB Wash buffer： 蒸餾水=1:19 的比例混合，即為 1×TMB Wash buffer。室溫保存6個月有效。

4、切片用蒸餾水清洗 3 次，每次 2min。

5、切片入10ml TMB孵育液(提前 20℃溫育)，避光孵育20min，其間不斷晃動。

6、切片入10ml TMB 顯色工作液(提前 20℃溫育)，避光孵育 20min，其間不斷晃動。7、漂洗：取10ml左右的1×TMB Wash buffer 漂洗切片2-3 次，每次 5min。

8、貼片，載玻片用鉻明礬明膠包被，室溫空氣干燥。

9、脫水、透明步驟按如下操作：

①蒸餾水 10s

②70%乙醇  10s

 ③95%乙醇  10s

④100%乙醇 2 次，每次 10s

⑤二甲*苯2次，每次 2～5min。

1. 中性樹膠封片，顯微鏡下觀察藍色反應。   

 注意事項：

1、如果出現高的反應背景或沉淀，表明TMB底物反應過于強烈。

2、所用器皿必須潔凈，避免含有氧化劑或還原劑，否則會產生非特異性反應。

3、TMB顯色液避免反復凍融，以免顯色效率下降。

4、TMB增強劑注意密閉保存，否則顯色效率下降。

有效期： 12 個月內有效。 

ELISA試劑盒免費代檢測和實驗代做報價