波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

 免疫熒光技術(shù)操作步驟 

一.  直接免疫熒光法測(cè)抗原 

基本原理 

        將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。 

試劑與儀器 

          磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4 

          熒光標(biāo)記的抗體溶液：以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 進(jìn)行稀釋 

          緩沖甘油：分析純無(wú)熒光的甘油 9 份+ pH9.2 0.2M 碳酸鹽緩沖液 1 份配制 

          搪瓷桶三只（內(nèi)有 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 1500ml） 

          有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布?jí)|） 

          熒光顯微鏡 

          玻片架 

          濾紙 

          37℃溫箱等。 

實(shí)驗(yàn)步驟 

1.  滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。 

2.  滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一

30min  

定時(shí)間（參考：30min）。 

3.  取出玻片，置玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 沖洗后，再按順序過(guò) 0.01mol/L，

pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不時(shí)振蕩。 

4.  取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。 

5.  立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度，一般可用“+”表示： 

（-）無(wú)熒光；（±）極弱的可疑熒光；（+）熒光較弱，但清楚可見(jiàn)；（++）熒光明亮；（+++ 

--++++）熒光閃亮。待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)“++”以上，而各種對(duì)照顯示為（±）

或（-），即可判定為陽(yáng)性。

注意事項(xiàng)

1.  對(duì)熒光標(biāo)記的抗體的稀釋，要保證抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋在 1：20-100 之

間，要自行摸索*梯度，建立的稀釋比例，抗體濃度過(guò)低，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過(guò)弱，

影響結(jié)果的觀察。 

2.  染色的溫度和時(shí)間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化，染色時(shí)間可以從 10 min 到數(shù)

小時(shí)，一般 30 min 已足夠。染色溫度多采用室溫（25℃左右），高于 37℃可加強(qiáng)染色效果，

但對(duì)不耐熱的抗原（如流行性乙型腦炎病毒）可采用 0-2℃的低溫，延長(zhǎng)染色時(shí)間。低溫染

色過(guò)夜較 37℃30 min 效果好的多。 

3.  為了保證熒光染色的正確性，試驗(yàn)時(shí)需設(shè)置下述對(duì)照，以排除某些非特異性熒光染

色的干擾。 

（1）標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照：標(biāo)本加 1-2 滴 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS。 

（2）特異性對(duì)照（抑制試驗(yàn)）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體，再加熒光標(biāo)記的特異性抗

體。 

    如果標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照和特異性對(duì)照呈無(wú)熒光或弱熒光，  待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為特異性陽(yáng)性染色。 

4.  一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過(guò) 3min，就有熒光減弱現(xiàn)象，經(jīng)熒光染色的標(biāo)本在當(dāng)天觀察，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降。

二.    間接免疫熒光法測(cè)抗原 

基本原理 

染色程序分為兩步，*步，用已知未標(biāo)記的抗體（待檢標(biāo)本）加到已知抗原（待檢標(biāo)本）

標(biāo)本上，在濕盒中 37℃保溫 30min，使抗原抗體充分結(jié)合，然后洗滌，除去未結(jié)合的抗體。

第二步，加上熒光標(biāo)記的抗球蛋白抗體或抗 IgG、IgM 抗體（通常為熒光標(biāo)記的對(duì)應(yīng)二抗）。

如果*步發(fā)生了抗原抗體反應(yīng)，標(biāo)記的熒光標(biāo)記的二抗就會(huì)和已結(jié)合抗原的抗體進(jìn)一步結(jié)

合，從而可鑒定被檢測(cè)抗原。 

試劑與儀器 

          磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4 

          緩沖甘油：分析純無(wú)熒光的甘油 9 份+ pH9.2 0.2M 碳酸鹽緩沖液 1 份配制。

          熒光標(biāo)記的抗人球蛋白抗體：以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 進(jìn)行稀釋  。 

          搪瓷桶三只（內(nèi)有 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 1500ml） 

          有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布?jí)|） 

          熒光顯微鏡 

          玻片架 

          濾紙 

          37℃溫箱等。 

實(shí)驗(yàn)步驟 

1.  滴加 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 于未知抗原標(biāo)本片，10min 后棄去，使標(biāo)本片保持一定濕度。 

2.  滴加以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 適當(dāng)稀釋抗體，覆蓋未知抗原標(biāo)本片。將玻片置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，37℃保溫 30min。 

3.  取出玻片，置于玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 沖洗 1-2 次，然后按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 5min，不時(shí)振蕩  。 

4.  取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，滴加一滴一定稀釋度的熒光標(biāo)記二

抗 

5.  將玻片平放在有蓋搪瓷盒內(nèi)，37℃保溫 30min。 

6.  重復(fù)操作 3。 

7.  取出玻片，用濾紙吸去多余水分，滴加一滴緩沖甘油，再覆以蓋玻片。

8.  熒光顯微鏡高倍視野下觀察，結(jié)果判定同直接法。 

注意事項(xiàng) 

1.  熒光染色后一般在 1h 內(nèi)完成觀察，或于 4℃保存 4h，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)  ，會(huì)使熒光減弱。 

2.  每次試驗(yàn)時(shí)  ，需設(shè)置以下兩種對(duì)照： 

（1） 陰性對(duì)照：陰性血清+熒光標(biāo)記物   （需有使用人員自行建立標(biāo)準(zhǔn)） 

（2） 熒光標(biāo)記物對(duì)照：PBS+熒光標(biāo)記物 

如果標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照和特異性對(duì)照呈無(wú)熒光或弱熒光，  待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為

特異性陽(yáng)性染色。  

3.  未知抗原標(biāo)本片需在操作的各個(gè)步驟中，始終保持濕潤(rùn)，避免干燥。 

4.  所滴加的抗體或熒光標(biāo)記物，應(yīng)始終保持在未知抗原標(biāo)本片上，避免因放置不平使液體

流失，從而造成非特異性熒光染色。 

Storage:  Store at –20 ºC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The 

lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater 

than a year when kept at -20ºC. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent 

of antibody, the antibody is stable for at least six weeks at 2-4 ºC. 

Important Note:  This product as supplied is intended for research use only, not for use in 

human, therapeutic or diagnostic applications.