波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

貨號(hào)：YJ2218                                                  規(guī)格：50管/24樣

Na⁺ K⁺-ATP 酶活性測(cè)定說明書

可見分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

Na⁺ K⁺- ATP 酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成 ADP和無機(jī)磷。

測(cè)定原理：

Na⁺ K⁺-ATP 酶分解ATP生成ADP及無機(jī)磷，通過測(cè)定無機(jī)磷的量來確定 ATP 酶活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5ml×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×3支，-20℃保存。用時(shí)每支加1mL蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃

可保存一周。

試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時(shí)加入 3mL 蒸餾水， 4℃保存。

試劑七：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周。

試劑八：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周。

試劑九：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑十：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將貯備液20倍稀釋，即取0.1mL試劑十加1.9mL蒸餾水

         充分混勻。

定磷劑的配制：按 H₂O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣品酶液的制備：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

操作步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）

混勻，8000g，25℃離心 10min，取上清液

3 定磷(在 1.5mLEP 管中依次加入下列試劑)

混勻，室溫放置 30 min，在 660nm 處比色。

注意：

1、由于每一個(gè)樣都必須做對(duì)照，本試劑盒50管保證測(cè)24份 Na⁺ K⁺ -ATP 酶。

2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格無磷。

3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

計(jì)算

1、血清（漿）Na⁺ K⁺-ATPase 活力的計(jì)算:

定義：每小時(shí)每毫升血清（漿）中 Na⁺ K⁺-ATP 酶分解ATP產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。

Na⁺ K⁺-ATP酶活力（μmol/h/mL）=[C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A

空白管）÷V 樣÷T=7.5×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 Na⁺ K⁺-ATPase 活力的計(jì)算：

（1）按蛋白濃度計(jì)算：

定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白中 Na⁺ K⁺-ATP酶分解ATP產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。

Na⁺ K⁺-ATP酶活力(μmol/h /mg)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷（Cpr×V 樣）÷T =7.5×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

定義：每小時(shí)每克組織中Na⁺ K⁺ -ATP 酶分解ATP產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。

Na⁺ K⁺-ATP 酶活力(μmol/h/g)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=7.5×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

定義：每小時(shí)每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞中 Na⁺ K⁺-ATP 酶分解ATP產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。

Na⁺ K⁺-ATP 酶活力(μmol/h /10⁴)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.5mL；V 樣：加入樣本體

積，0.2mL ；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/6 小時(shí)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)

濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒說明書

高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒說明書

詹納斯綠 B 染色液(0.2%)說明書